Details

Áåðäè÷åâåö È.Í., Øèìøèëàøâèëè Õ.Ð., Ãåðàñèìåíêî* È.Ì., Ñèíäàðîâñêàÿ* ß.Ð., Øåëóäüêî* Þ.Â., Ãîëäåíêîâà-Ïàâëîâà È.Â.

Èíñòèòóò îáùåé ãåíåòèêè èì. Í.È. Âàâèëîâà ÐÀÍ
Ðîññèÿ, 119991, Ìîñêâà, óë. Ãóáêèíà, 3, e-mail: This e-mail address is being protected from spambots. You need JavaScript enabled to view it.
^*Èíñòèòóò êëåòî÷íîé áèîëîãèè è ãåíåòè÷åñêîé èíæåíåðèè ÍÀÍ Óêðàèíû
Óêðàèíà, 03680, Êèåâ, óë. Àêàäåìèêà Çàáîëîòíîãî, 148.

Ââåäåíèå
Âàæíûì ýòàïîì â ïðîöåññå òðàíñãåíåçà ÿâëÿåòñÿ ýôôåêòèâíûé îòáîð èç áîëüøîãî ÷èñëà ïåðâè÷íûõ òðàíñôîðìàíòîâ ðàñòåíèé, ñîäåðæàùèõ â ãåíîìå âñòðîéêó öåëåâîãî ãåíà, à òàêæå ïîñëåäóþùèé àíàëèç íàñëåäîâàíèÿ òðàíñãåíà â ðÿäó ïîêîëåíèé. Ïðîñòûì è ýêîíîìè÷íûì ìåòîäîì äëÿ ýòîãî ÿâëÿåòñÿ ïîëèìåðàçíàÿ öåïíàÿ ðåàêöèÿ. Îäíàêî äëÿ òîãî, ÷òîáû ïðîàíàëèçèðîâàòü òðàíñôîðìàíòû íåîáõîäèìî ðåøèòü ðÿä çàäà÷ è ïðîâåñòè íåñêîëüêî ïîëèìåðàçíûõ öåïíûõ ðåàêöèé, óñëîâèÿ äëÿ êàæäîé èç êîòîðûõ íåîáõîäèìî ïîäáèðàòü èíäèâèäóàëüíî, ÷òî â êîíå÷íîì èòîãå çàíèìàåò äîñòàòî÷íî ìíîãî âðåìåíè.  ñâÿçè ñ ýòèì îïòèìèçàöèÿ óñëîâèé ÏÖÐ äëÿ îòáîðà è àíàëèçà òðàíñãåííûõ ðàñòåíèé ÿâëÿåòñÿ àêòóàëüíîé çàäà÷åé.

Ìàòåðèàëû è ìåòîäû
 ðàáîòå èñïîëüçîâàíû ñîâðåìåííûå ìåòîäû âûäåëåíèÿ ãåíîìíîé ÄÍÊ ðàñòåíèé, áèîèíôîðìàöèîííûå ìåòîäû ïî ïîäáîðó ïðàéìåðîâ, à òàêæå ìåòîäû ÏÖÐ.

Ðåçóëüòàòû è îáñóæäåíèÿ
Äëÿ ýôôåêòèâíîãî îòáîðà è àíàëèçà òðàíñãåííûõ ðàñòåíèé íàìè ðàçðàáîòàí ìåòîä ìóëüòèïëåêñíîé ÏÖÐ. Îñíîâà ìåòîäà ñîñòîèò â òîì, ÷òî îí ïîçâîëÿåò ðåøèòü íåñêîëüêî çàäà÷ îäíîâðåìåííî, à èìåííî: 1) îïðåäåëèòü ïðèñóòñòâèå â ãåíîìå òðàíñôîðìàíòà ïîñëåäîâàòåëüíîñòåé öåëåâîãî, ñåëåêòèâíîãî, ðåïîðòåðíîãî (åñëè òàêîâîé ïðèñóòñòâóåò â ýêñïðåññèîííîì âåêòîðå) ãåíîâ, à òàêæå ðåãóëÿòîðíûõ ýëåìåíòîâ âåêòîðíîé êîíñòðóêöèè; 2) îöåíèòü êà÷åñòâî ïðåïàðàòà ÄÍÊ (ïî ïîñëåäîâàòåëüíîñòè ãåíà äîìàøíåãî õîçÿéñòâà, 3) èñêëþ÷èòü ïðèñóòñòâèå êîíòàìèíàöèè Agrobacterium tumefaciens â îáðàçöàõ ÄÍÊ ïðè àãðîáàêòåðèàëüíîé òðàíñôîðìàöèè ðàñòåíèé.

 ðåçóëüòàòå çà îäèí ðàóíä ÏÖÐ èç áîëüøîãî ÷èñëà ïåðâè÷íûõ òðàíñôîðìàíòîâ ìîæíî ýôôåêòèâíî îòîáðàòü ðàñòåíèÿ, íåñóùèå ïîñëåäîâàòåëüíîñòü ãåòåðîëîãè÷íîãî öåëåâîãî ãåíà, à òàêæå ïðîàíàëèçèðîâàòü ñòàáèëüíîñòü íàñëåäîâàíèÿ Ò-ÄÍÊ â ðÿäó ïîêîëåíèé òðàíñãåííûõ ðàñòåíèé.

Ðàçðàáîòàííûé ìåòîä óñïåøíî àïðîáèðîâàí êàê íà ìîäåëüíûõ îáúåêòàõ (òðàíñãåííûå ðàñòåíèÿ òàáàêà è àðàáèäîïñèñà), òàê è íà êîëëåêöèè òðàíñôîðìàíòîâ ñåëüñêîõîçÿéñòâåííî-âàæíûõ êóëüòóð (êàðòîôåëü, òîìàòû, ñâåêëà, ñàëàò, ðàïñ).

Ðàáîòà âûïîëíåíà ïðè ôèíàíñîâîé ïîääåðæêå ãðàíòîâ ÐÔÔÈ ¹08-04-90410_Óêð_à è ÐÔÔÈ ¹09-04-01518_à.