• Print
Details
Бердичевец И.Н., Шимшилашвили Х.Р., Герасименко* И.М., Синдаровская* Я.Р., Шелудько* Ю.В., Голденкова-Павлова И.В.

Институт общей генетики им. Н.И. Вавилова РАН
Россия, 119991, Москва, ул. Губкина, 3, e-mail: This e-mail address is being protected from spambots. You need JavaScript enabled to view it.
*Институт клеточной биологии и генетической инженерии НАН Украины
Украина, 03680, Киев, ул. Академика Заболотного, 148.

Введение
Важным этапом в процессе трансгенеза является эффективный отбор из большого числа первичных трансформантов растений, содержащих в геноме встройку целевого гена, а также последующий анализ наследования трансгена в ряду поколений. Простым и экономичным методом для этого является полимеразная цепная реакция. Однако для того, чтобы проанализировать трансформанты необходимо решить ряд задач и провести несколько полимеразных цепных реакций, условия для каждой из которых необходимо подбирать индивидуально, что в конечном итоге занимает достаточно много времени. В связи с этим оптимизация условий ПЦР для отбора и анализа трансгенных растений является актуальной задачей.

Материалы и методы
В работе использованы современные методы выделения геномной ДНК растений, биоинформационные методы по подбору праймеров, а также методы ПЦР.

Результаты и обсуждения
Для эффективного отбора и анализа трансгенных растений нами разработан метод мультиплексной ПЦР. Основа метода состоит в том, что он позволяет решить несколько задач одновременно, а именно: 1) определить присутствие в геноме трансформанта последовательностей целевого, селективного, репортерного (если таковой присутствует в экспрессионном векторе) генов, а также регуляторных элементов векторной конструкции; 2) оценить качество препарата ДНК (по последовательности гена домашнего хозяйства, 3) исключить присутствие контаминации Agrobacterium tumefaciens в образцах ДНК при агробактериальной трансформации растений.

В результате за один раунд ПЦР из большого числа первичных трансформантов можно эффективно отобрать растения, несущие последовательность гетерологичного целевого гена, а также проанализировать стабильность наследования Т-ДНК в ряду поколений трансгенных растений.

Разработанный метод успешно апробирован как на модельных объектах (трансгенные растения табака и арабидопсиса), так и на коллекции трансформантов сельскохозяйственно-важных культур (картофель, томаты, свекла, салат, рапс).

Работа выполнена при финансовой поддержке грантов РФФИ №08-04-90410_Укр_а и РФФИ №09-04-01518_а.