• Print
Details
Голденкова-Павлова И.В., Вячеславова А.О., Мустафаев О.

Институт общей генетики им. Н.И. Вавилова РАН
Россия, 119991, Москва, ул. Губкина, 3. E-mail: This e-mail address is being protected from spambots. You need JavaScript enabled to view it.

 

Введение
При изучении функций белков в растениях, а также при использовании растений как биофабрик для наработки целевых белков или пептидов, исследователи зачастую сталкиваются с трудностями по поиску эффективной системы экспрессии каждого индивидуального белка или пептида, определении уровня его накопления и стабильности в гетерологичном организме. Для того чтобы преодолеть существующие проблемы, используются различные подходы. Одним из таких подходов может быть экспрессия изучаемого пептида или белка в составе гибридного белка, состоящего из целевого белка и репоретрного белка. Нами было выдвинуто предположение о том, что особенности трехмерной структуры и основные свойства термостабильной лихеназы Clostridium thermocellum (высокая удельная активность и термостабильность) позволяют использовать термостабильную лихеназу как удобный репортерный белок в фундаментальных и прикладных исследованиях. По активности лихеназы можно судить о сохранности белка, а свойство термостабильности может использоваться при очистке белков.

Материалы и методы
В работе использованы методы молекулярного клонирования, метод агроинфильтрации растений, количественные и качественные методы анализа активности термостабильной лихеназы.

Результаты и обсуждения
На экспериментальных моделях трансгенных растений, которые в качестве целевых генов использованы: ген recA, продукт которого участвует в процессах рекомбинации; ген cry3aM, продукт которого обеспечивает устойчивость растений к личинкам колорадского жука; ген desA, продукт которого участвует в модификации жирных кислот мембранных липидов, показано, что термостабильная лихеназа является удобным репортеным белков как для определения функций белкового продукта целевого гена, так и для выбора эффективной системы экспрессии гетерологичных генов в растениях.

Сконструированы модифицированные варианты термостабильной лихеназы, четыре из которых сохранили основные свойства репортера: активность и термостабильность. Показано, что термостабильная лихеназа является удобным репортерным белком-носителем для целевых белков и пептидов, в том числе и для экспрессии нескольких антигенных пептидов одновременно.

Автор благодарен коллегам, которые непосредственно участвовали в апробации предложенного подхода: М.М. Бабыкин, С.А. Голенкина, В.В. Зинченко, Е.В. Исаенко, Н.А. Картель, Р.А. Комахин, А.М. Носов, Н.О. Юрьева, Х.Р. Шимшилашвили.

Работа выполнена при финансовой поддержке гранта РФФИ №09-04-01518_а.